DEHP in vitro interfiere con la señalización androgénica adenohipofisaria

Resumen

El ftalato DEHP es un disruptor endocrino que presenta afinidad por el receptor de andrógenos (AR) e interactúa con el bolsillo de unión al ligando, sugiriendo su potencial para interferir con su señalización. El órgano blanco de este trabajo es la adenohipófisis, la cual está regulada por testosterona a través del AR, expresado en sus diferentes poblaciones celulares. Considerando esto, el objetivo fue determinar si DEHP afecta la señalización androgénica adenohipofisaria utilizando un sistema in vitro.

Tres cultivos primarios adenohipofisarios independientes de ratas macho adultos fueron estimulados con DEHP 0.1 ó 1µM por 72h. En paralelo, se realizó la co-estimulación con testosterona 0.01µM durante los 15 ó 30 min finales. Los cultivos fueron procesados para la determinación de la localización subcelular del AR por inmunofluorescencia y fraccionamiento subcelular seguido de western blot (WB) y análisis de la activación de la vía MAPK mediante la determinación de la fosforilación de ERK (pERK/tERK) por WB. Análisis estadístico ANOVA-Tukey, p<0.05 considerado estadísticamente diferente. 

Ambas dosis de DEHP disminuyeron significativamente el porcentaje de núcleos AR+ en aproximadamente un 32% en relación al control. Testosterona aumentó el porcentaje de núcleos AR+, mientras que la co-incubación de esta hormona con ambas dosis de DEHP redujo significativamente, en aproximadamente un 60%, los núcleos AR+ en relación a testosterona sola en ambos tiempos analizados. La expresión proteica del AR evidenció un patrón similar al observado por inmunofluorescencia, con reducción del AR nuclear e incremento en citoplasma de células expuestas a DEHP sólo o co-incubado con testosterona. Tanto DEHP como testosterona solos incrementaron significativamente la fosforilación de ERK1/2 en relación al control, El co-estímulo DEHP/testosterona durante 30 min mostró niveles de pERK mayores a los observados con testosterona sola, similares a DEHP individualmente. 

Estos resultados muestran que DEHP retiene al AR en el citoplasma, sugiriendo que inhibe la traslocación nuclear inducida por testosterona y que altera la señalización androgénica, incrementando la activación de ERK inducida por testosterona.