Evaluación de los efectos antiproliferativos del calcitriol y menadiona en células de cáncer de colon

Resumen

El cáncer de colon es una de las principales causas de muerte a nivel mundial, lo que resalta la necesidad de nuevas estrategias farmacológicas, especialmente en variantes resistentes. En estudios previos hemos demostrado que drogas como menadiona (MEN), D, L-butionina-S,R-sulfoximina o calcitriol (D), solas o en combinación, mejoran la sensibilidad de líneas celulares de tumores de mama y colon al modificar el estado oxidativo. El objetivo del presente trabajo fue evaluar los mecanismos subyacentes a los efectos antiproliferativos de la combinación de MEN y D en células Caco-2, una línea celular de adenocarcinoma de colon humano.

Utilizamos MEN (20 µM), D (200 nM), ambos o vehículo (etanol) en células Caco-2. Cuantificamos proliferación celular mediante tinción con cristal violeta con y sin inhibidores de autofagia y antioxidantes; migración celular mediante ensayo de la herida (0-9h); cambios morfológicos con tinciones May-Grunwald Giemsa y bromuro de etidio/naranja de acridina; niveles de anión superóxido (AS) y actividad de catalasa (CAT) por espectrofotometría. Determinamos apoptosis, analizamos ciclo celular y cuantificamos contenido de especies reactivas del oxígeno (ROS, sonda diclorofluoresceína diacetato) por citometría de flujo. Para el análisis estadístico se utilizó el test ANOVA de una vía y Bonferroni.

Los efectos antiproliferativos de MEN+D comenzaron a las 24 h mostrando dependencia del tiempo y las dosis. La combinación redujo la proliferación celular en un 50% a las 48 h con las dosis seleccionadas (p<0.05 vs control). A su vez, retrasó la migración celular y produjo cambios morfológicos compatibles con necrosis y apoptosis. Se observaron alteraciones significativas en el estado oxidativo: el nivel de AS aumentó 80% (p<0.05 vs control), CAT 150% (p<0.05 vs control) y el contenido total de ROS 60% (p<0.05 vs control) a las 48 h. Se produjo arresto del ciclo celular en G2/M concomitante con un incremento x12 en el nivel de apoptosis y x4 en necrosis (control vs MEN+D).

Este estudio demuestra que la combinación de MEN+D tiene acción antiproliferativa en células Caco-2, y sugiere que podría ser una estrategia adicional para tratar tumores resistentes a las terapias convencionales.

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